⑵稻草麸皮培养基（草菇） 干稻草78%、麸皮或米糠20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、水适量 方法：稻草切成2cm长→发酵→＋蔗糖＋麸皮＋过磷酸钙 接种方法 二级种 三级种 用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上 用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋中或瓶中料面上 注意：1、严格挑选待接的菌种质量； 2、勿接入表面老菌丝及老种块。 四.二、三级菌种的培养 菌种的培养实际就是对菌丝体的培养 培养条件 场所清洁 空气清新 光线% 培养方法 勿堆放过挤 及时剔除污染瓶（袋） 栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧 控制菌龄（菌丝长满7-10天后使用） 五.二、三级菌种的质量鉴别判定 菌丝白（或呈该菌种应有的颜色） 均匀、粗壮、有菇香味 接种后萌发快 无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象 菌种出售必须贴有菌种质量合格标签，标明菌种种类、级别、品种、生产单位和接种日期。 合格菌种 * * 第4章 食用菌菌种生产 第一节 菌种概述 第二节 主要生产设备 第三节 菌种培养基 第四节 接种 第五节 菌种培养及质量的鉴定 第六节 菌种保藏及复壮 第六讲 二、三级菌种制作技术 《食用菌生产技术》课程组 二、三级菌种制作技术 一.二、三级菌种培养基的配制 二.二、三级菌种培养基的灭菌 三.二、三级菌种的接种 四.二、三级菌种的培养 五.二、三级菌种的质量鉴别判定 原种和栽培种的生产技术 原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法绝大多数都是相同的。 1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，大多数都用在繁殖栽培种，也可直接用来生产。（母种→原种） 2）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用来生产。（原种→栽培种) 二、三级菌种制作流程 配制培养基 灭 菌 二级菌种 培 养 接 种 培 养 接 种 灭 菌 配制培养基 三级菌种 一级菌种 二级菌种 (二、三级菌种制作的步骤大同小异) 原种、栽培种的制作流程 按配方称取原料→拌料→装瓶（袋）→打洞（孔径1cm深至瓶底）→灭菌（1.5kg／cm2，1.5~2h）→冷却→接种（接入黄豆大小一块）→培养（25℃ ~27℃）→菌丝长满瓶（袋）→培养7d~8d→扩大成栽培种。 一.二、三级菌种培养基的配制 （一）配制总原则 1．选择适宜的营养的东西。 2．营养物质间配制的比例要恰当。 3．选择经济实用、来源广泛的原料。 4．适宜的pH值和含水量。 培养基（料）配制原则 ⑴掌握碳氮比例 食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳氮比（C／Ｎ）。 菌丝体生长阶段：C／Ｎ=20∶1； 子实体形成阶段：C／Ｎ=30~40∶1； C／Ｎ 过高，菌丝体生长过旺，而子实体小、产量低。 ⑵ 选好培养材料 ①首先选不含杀菌物质的木屑 杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀菌物质，会抑制食用菌生长。要用一定要经过处理，如：蒸煮、晒等。 ②根据食用菌的喜好选木屑 如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好； 培养金针菇用构，楮等木屑就比用榆、槐等木屑好。 ⑶ 注意物理性状 培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，以及持水性能等物理性状。 ⑷调节酸碱度 各种食用菌需要的pH值不同，配制培养料时，应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值，生产上有时为控制这类杂菌的发生，往往将pH值适当调高0.5~1。 原料选择的需要注意的几点（几点说明） ⑴木屑： 树种：除松树、杉树、柏树、樟树、芸香属、按属等树种之外，绝大多数阔叶树和木屑都可通过。（因其中含有酚、酯、精油等杀菌物质） 粗细：不宜过细，以免培养基过湿或通气不良。 选择：根据食用菌分解能力选择，分解能力较强的食用菌采用硬质阔叶树木屑，反之采用软质树种木屑。 如：金针菇分解能力较弱，以含单宁较少木屑为宜，木屑越陈越好； 茯苓菌分解能力较强，可采用颗粒粗的松木屑或松木钉。 ⑵米糠、麸皮作用 作用：补充氮源和维生素。 稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料，含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。 麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。 米糠：含氮量比麸皮少。 用量：一般10%~20%，过多易引起污染。 ⑶加糖的作用 ①初期补充碳源，用量1%~5%。 ②诱导胞外酶的产生。 纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入少量白糖作为食用菌初期补充碳源，促进菌丝快速生长，同时诱导纤维素酶的产生，更好地利用纤维素。 ⑷Ca2＋作用 ①提供食用菌钙离子：原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子； ②钙不断中和食用菌产生的有机酸； ③钙还能中和单宁； ④减少过量K、Mg对菌丝中毒，促进菌丝生长。 1、常用培养料的配方和配制方法 培养料 木屑——米糠培养料：木生菇类，如：木耳、银耳、香菇； 草茎或草粪——厩肥培养料：草生菇类，如：蘑菇、草菇； 棉籽壳——米糠培养料：多种菇类。 （二）培养基常用的配方 ⑴粪草培养基（适用于蘑菇） 稻草或麦秸20kg、粪肥（干）30kg、石膏500g、水适量。 方法：稻草切成2cm长＋粪肥→混合发酵＋石膏→调水→装瓶→灭菌 1、常用培养料的配方和配制方法 ⑶木屑米糠培养基（香菇、木耳、猴头、平菇等） 木屑78%、麸皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水适量。? ⑷木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳） 木屑50kg、麸皮15kg、黄豆粉1kg、蔗糖0.75kg、MgSO4 0.25kg、水70~75kg。 ⑸棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇） 棉籽壳99.7%、蔗糖0.1%、石膏0.2%、水适量。 1、常用培养料的配方和配制方法 （三）培养基配制步骤 称料 拌料 调节pH值 分装培养料 清洁（洗或擦）瓶、袋外壁 封口 1.不溶性主、辅料混拌均匀 2.可溶性辅料溶于水后拌入主辅料 3.注意检查含水量（手测法等） 比实际要求的pH值调高1左右 容器：菌种瓶、菌种袋 要求：上紧下松，外紧内松，中间一个洞 二.二、三级菌种培养基的灭菌 1．灭菌方法及要求 高压蒸汽灭菌：压力1.5kg/cm2，温度126-128℃，时间1-2h（谷粒和经过堆制发酵的粪草培养基应达到2-2.5h）。 常压蒸汽灭菌：100℃，保持10-12h 卧式高压蒸汽灭菌锅 2．灭菌效果检验 随机取几瓶（袋）置于25-30℃温度下空白培养4-6天，会出现以下情况： 全部感杂 少数感杂 全部没有杂菌 3、高压蒸汽灭菌锅的使用方法 按照仪器操作说明操作！ 分析原因 ？ 三.二、三级菌种的接种 概念：菌种移至新培养基上的过程 关键：无菌操作 接种 接种环境消毒灭菌 酒精棉球消毒双手 操作器具消毒灭菌 开启的管口、瓶口靠近灯焰 拔出的棉塞勿触及任何地方 动作快、准、稳 无菌 操作 要点 * 第4章 食用菌菌种生产 第一节 菌种概述 第二节 主要生产设备 第三节 菌种培养基 第四节 接种 第五节 菌种培养及质量的鉴定 第六节 菌种保藏及复壮
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